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ELISA試劑盒特殊的包被方式
點擊次數:1131 更新時間:2016-08-23

ELISA試劑盒特殊的包被方式


其后 通過抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面,其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用,人elisa試劑盒包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳。間接包被 的另一優點是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可采用。例如,在檢測抗DNA抗體時,需用 DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法: 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。

人ELISA試劑盒加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被的反應孔
中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)

于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,
37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

將 抗原或抗體固定在過程稱為包被。換言之,包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子 結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、人ELISA試劑盒濃度等的影響。載體對不同 蛋白質的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,因此更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附 力,其聯結多發生在Fc段上,抗體結合點暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。

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